分析方法驗(yàn)證—主要內(nèi)容? 主要內(nèi)容：

? 1.法規(guī)要求

? 2.定義、適用范圍、目的和發(fā)起時(shí)機(jī)

? 3.驗(yàn)證的分析項(xiàng)目

? 4.驗(yàn)證的指標(biāo)

? 5.舉例（略）

第十二條 質(zhì)量控制的基本要求：

（四）檢驗(yàn)方法應(yīng)當(dāng)經(jīng)過驗(yàn)證或確認(rèn)；

第一百三十九條 企業(yè)的廠房、設(shè)施、設(shè)備和檢驗(yàn)儀器應(yīng)當(dāng)經(jīng)過確認(rèn)，應(yīng)當(dāng)采用經(jīng)過驗(yàn)證的生產(chǎn)工藝、操作規(guī)程和檢驗(yàn)方法進(jìn)行生產(chǎn)、操作和檢驗(yàn)，并保持持續(xù)的驗(yàn)證狀態(tài)。

第一百四十二條 當(dāng)影響產(chǎn)品質(zhì)量的主要因素，如原輔料、與藥品直接接觸的包裝材料、生產(chǎn)設(shè)備、生產(chǎn)環(huán)境（或廠房）、生產(chǎn)工藝、檢驗(yàn)方法等發(fā)生變更時(shí)，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行確認(rèn)或驗(yàn)證。必要時(shí)，還應(yīng)當(dāng)經(jīng)藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)。

第一百四十三條 清潔方法應(yīng)當(dāng)經(jīng)過驗(yàn)證，證實(shí)其清潔的效果，以有效防止污染和交叉污染。清潔驗(yàn)證應(yīng)當(dāng)綜合考慮設(shè)備使用情況、所使用的清潔劑和消毒劑、取樣方法和位置以及相應(yīng)的取樣回收率、殘留物的性質(zhì)和限度、殘留物檢驗(yàn)方法的靈敏度等因素。

分析方法驗(yàn)證—法規(guī)要求（2/3）第一百四十九條 應(yīng)當(dāng)根據(jù)驗(yàn)證的結(jié)果確認(rèn)工藝規(guī)程和操作規(guī)程。

第二百二十三條 物料和不同生產(chǎn)階段產(chǎn)品的檢驗(yàn)應(yīng)當(dāng)至少符合以下要求：

（一）企業(yè)應(yīng)當(dāng)確保藥品按照注冊批準(zhǔn)的方法進(jìn)行全項(xiàng)檢驗(yàn)；

（二）符合下列情形之一的，應(yīng)當(dāng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證：

1.采用新的檢驗(yàn)方法;

2.檢驗(yàn)方法需變更的；

3.采用《中華人民共和國藥典》及其他法定標(biāo)準(zhǔn)未收載的檢驗(yàn)方法；

4.法規(guī)規(guī)定的其他需要驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法。

（三）對(duì)不需要進(jìn)行驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法，企業(yè)應(yīng)當(dāng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)，以確保檢驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠；

（四）檢驗(yàn)應(yīng)當(dāng)有書面操作規(guī)程，規(guī)定所用方法、儀器和設(shè)備，檢驗(yàn)操作規(guī)程的內(nèi)容應(yīng)當(dāng)與經(jīng)確認(rèn)或驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法一致；

分析方法驗(yàn)證—法規(guī)要求（3/3）第二百三十條 產(chǎn)品的放行應(yīng)當(dāng)至少符合以下要求：

（一）在批準(zhǔn)放行前，應(yīng)當(dāng)對(duì)每批藥品進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，保證藥品及其生產(chǎn)應(yīng)當(dāng)符合注冊和本規(guī)范要求，并確認(rèn)以下各項(xiàng)內(nèi)容：

1.主要生產(chǎn)工藝和檢驗(yàn)方法經(jīng)過驗(yàn)證；

分析方法驗(yàn)證—定義、適用范圍、目的和發(fā)起時(shí)機(jī)（1/2）? 方法驗(yàn)證定義

? 國際：ICHQ2（R1）：是闡明分析方法適用于它所期望的應(yīng)用目的。

? 美國：FDA工業(yè)指南/USP（1225）

FDA:是一個(gè)闡述分析方法適合于其使用目的的過程。

USP：是一個(gè)按照已創(chuàng)建的實(shí)驗(yàn)室研究來證明方法的性能參數(shù)符合期望的分析應(yīng)用的過程。

? 國內(nèi)：SFDA/ChP

SFDA:證明任何操作規(guī)程（或方法），生產(chǎn)工藝或系統(tǒng)能夠達(dá)到預(yù)期結(jié)果的一系列活動(dòng)。

ChP（9101）：證明采用的方法適合于相應(yīng)的要求。

1.任何分析檢測的目的都是為了獲得穩(wěn)定、可靠和準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，方法驗(yàn)證在其中起著極為重要的作用。

2.是對(duì)標(biāo)準(zhǔn)中擬采用的分析方法是否能達(dá)到預(yù)期目的。

3.證明由分析方法誤差而導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果判斷錯(cuò)誤的概率是否在允許范圍之內(nèi)，而進(jìn)行的科學(xué)證明。

分析方法驗(yàn)證—定義、適用范圍、目的和發(fā)起時(shí)機(jī)（2/2）? 適用范圍、目的和發(fā)起時(shí)機(jī)內(nèi)容 適用范圍 目的 發(fā)起時(shí)機(jī)

方法驗(yàn)證 1.采用新的檢驗(yàn)方法；2.檢驗(yàn)方法需變更的；3.采用《中國藥典》及其他法定標(biāo)準(zhǔn)未收載的檢驗(yàn)方法；4.法規(guī)規(guī)定的其他需要驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法；

證明采用方法適合相應(yīng)檢測要求

1.創(chuàng)建質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)；2.在藥品生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更、原分析方法修訂時(shí)；

方法確認(rèn) 1.不需要進(jìn)行驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法；2.藥典方法和其他法定方法；

確認(rèn)方法在本實(shí)驗(yàn)室條件下的適用性

在實(shí)驗(yàn)室批準(zhǔn)使用該方法前

方法轉(zhuǎn)移 將分析方法由A實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)移到B實(shí)驗(yàn)室

確認(rèn)采用的方法在B實(shí)驗(yàn)室條件下的適用性

在B實(shí)驗(yàn)室批準(zhǔn)使用該方法前

分析方法驗(yàn)證—驗(yàn)證的分析項(xiàng)目? 需要驗(yàn)證的分析項(xiàng)目：鑒別試驗(yàn)、雜質(zhì)測定（限度或定量分析）、含量測定和特性參數(shù)

（如：溶出度、釋放度、含量均勻度等）

? 鑒別的目的在于判定被分析物是目標(biāo)化合物，而非其他物質(zhì)。用于鑒別的分析方法要求具有較強(qiáng)的專屬性和耐用性。

? 雜質(zhì)檢查主要用于控制主成分以外的雜質(zhì)，如無機(jī)、有機(jī)雜質(zhì)等。雜質(zhì)檢查分為限度檢查和定量測定兩部分。用于限度檢查的分析方法驗(yàn)證側(cè)重專屬性、檢測限和耐用性。用于定量測定的分析方法驗(yàn)證強(qiáng)調(diào)專屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性、范圍、定量限和耐用性。

? 含量測定對(duì)準(zhǔn)確度要求較高，因此所采用的分析方法要求具有一定的專屬性、準(zhǔn)確度和線性等的要求。

? 不需要驗(yàn)證的分析項(xiàng)目：對(duì)于僅需要按照實(shí)驗(yàn)室日常測試操作步驟即可測定的檢驗(yàn)項(xiàng)目不需要進(jìn)行驗(yàn)證，如外觀、崩解時(shí)限、密度、重量、pH值、灰分、裝量等等。

分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（內(nèi)容）? 驗(yàn)證的指標(biāo)：

? 專屬性

? 準(zhǔn)確度

? 精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）

? 檢測限

? 定量限

? 線性

? 范圍

? 耐用性

分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（項(xiàng)目與指標(biāo)關(guān)系表）? 分析項(xiàng)目與相應(yīng)的驗(yàn)證指標(biāo)見下表：

分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（專屬性）? 專屬性：系指在其他成分（如雜質(zhì)、輔料等）可能存在下，采用的分析方法能正確測定出被測物

的能力。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查和含量測定方法，均應(yīng)考察其專屬性。

? 評(píng)價(jià)方法：

1.分離度：以分離度（試驗(yàn)）溶液試驗(yàn)，分離度應(yīng)符合要求；

2.陰性試樣：以不含被測成分的供試品（除去含待測成分藥物或不含待測成分的模擬處方，通常稱為陰性試驗(yàn)）試驗(yàn)

3.共存物：在共存物（或雜質(zhì)）可獲得的情況下，試樣中可加入共存物，考察測定結(jié)果是否受干擾；

4.方法比較：測定可能含有共存物如雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的供試品，與用另一個(gè)經(jīng)驗(yàn)證的方法或藥典方法測定結(jié)果比較；

5.色譜峰純度：用光二極管陣列檢測器（DAD）和質(zhì)譜檢測器進(jìn)行峰純度檢查；

分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（準(zhǔn)確度）? 準(zhǔn)確度:系指用所創(chuàng)建的方法測定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率（%）表

示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的線性范圍內(nèi)測定試驗(yàn)。準(zhǔn)確度也可由所測定的精密度、線性和專屬性推算出來。

? 評(píng)價(jià)方法：（化學(xué)藥含量測定、化學(xué)藥雜質(zhì)定量、中藥化學(xué)成分測定的準(zhǔn)確度）

1.加樣回收（回收率試驗(yàn)是評(píng)價(jià)準(zhǔn)確度最為常用、較為簡單的方法之一）：（1）模擬樣品（空白輔料和對(duì)照品）；（2）標(biāo)準(zhǔn)加入法（在樣品中加入對(duì)照品）；

2.非加樣回收（在無法或無必要加樣回收試驗(yàn)）：（1）測試對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）；（2）由精密度、線性和專屬性數(shù)據(jù)來評(píng)價(jià)；（3）與已知準(zhǔn)確度的標(biāo)準(zhǔn)方法比較；

? 數(shù)據(jù)要求：

1.用同一濃度平行6份測定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；或高、中、低3個(gè)不同濃度，分別制備3份供試品溶液，用9個(gè)測定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。

2.應(yīng)報(bào)告已知加入量的回收率（%），或測定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差或置信區(qū)間（置信度一般為95%）。

3.在基質(zhì)復(fù)雜、組分含量低于0.01%及多成分等分析中，回收率限度可適當(dāng)放寬。

4.樣品中待測定成分含量與回收率限度表（略）—來源為美國藥典論壇PF39（6）（1200）中，準(zhǔn)確度可接受標(biāo)準(zhǔn)公式為：回收率=100%±2C – 0 . 1 5 0 5%，其中C為待測成分含量。（美國AOAC指導(dǎo)原則）

分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（精密度）? 精密度：系指在規(guī)定的測試條件下，同一份均勻的供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近

程度。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性。

? 評(píng)價(jià)方法：

1.重復(fù)性：a.在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度（相當(dāng)于100%濃度水平）的供試品，用至少測定6次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；b.設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度分別制備3份供試品溶液進(jìn)行測定，用9個(gè)測定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)（考慮樣品濃度范圍）；

2.中間精密度：為考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響。變動(dòng)因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備。

3.重現(xiàn)性：通過不同實(shí)驗(yàn)室協(xié)同檢驗(yàn)獲得重現(xiàn)性結(jié)果。

?數(shù)據(jù)要求：

1.應(yīng)報(bào)告偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差或置信區(qū)間。

2.樣品中待測定成分含量和精密度RSD可接受范圍參考表（略），計(jì)算公式，重復(fù)性：RSD r=C – 0 . 1 5 0 5；重現(xiàn)性：RSDR=2C – 0 . 1 5 0 5，其中C為待測定成分含量（公式來源美國AOAC指導(dǎo)原準(zhǔn)則）。可接受范圍可在給出數(shù)值0.5—2倍區(qū)間。

3.在基質(zhì)復(fù)雜、組分含量低于0.01%及多成分等分析中，精密度限度可適當(dāng)放寬。

分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（檢測限和定量限）? 檢測限（LOD）：系指試樣中被測物能被檢測出的最低量，不必準(zhǔn)確定量。

? 定量限（LOQ）：系指試樣中被測物能被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)符合準(zhǔn)確度和精密度要求。

? 評(píng)價(jià)方法：

1.直觀法：用已知濃度的被測物，試驗(yàn)出被可靠地檢測（定量）的最低濃度和量。

2.信噪比法：一般以信噪比為3:1或10:1時(shí)相對(duì)應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限和定量限。

3.基于響應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率法。（公式略）

分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（線性）? 線性：系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，檢測結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈比例關(guān)系的程度。

? 評(píng)價(jià)方法：

1.應(yīng)在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)測定線性關(guān)系。

2.可用同一對(duì)照品（或工作對(duì)照品）貯備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱取同一對(duì)照品（或工作對(duì)照品），制備一系列對(duì)照品（或工作對(duì)照品）溶液的方法進(jìn)行測定，至少制備5份測試樣品。以測得的響應(yīng)信號(hào)作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。

?數(shù)據(jù)要求：

1.線性范圍要足夠?qū)?，以保證供試品溶液中待測成分的濃度（或量）落在線性范圍內(nèi)，且最好處于線性曲線的中間部分。

2.線性范圍最低點(diǎn)的濃度不得低于方法的定量限。

3.常量測定：回歸曲線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.998，Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的2%以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。

4.微量測定：回歸曲線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.990，Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的25%以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%。

5.應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)、各濃度點(diǎn)誤差、殘差平方和和線性圖（或其他數(shù)學(xué)模型）。

分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（范圍）? 范圍：系指分析方法能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性要求時(shí)高低限濃度或量的區(qū)間。

? 確定依據(jù)：a.應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用及其線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求確定。b.線性范圍應(yīng)足夠?qū)?，?yīng)能覆蓋實(shí)際供試品的全部待測濃度，和準(zhǔn)確度、精密度試驗(yàn)的濃度范圍。

1.原料藥和制劑含量測定，范圍一般為測定濃度的80%—120%；

2.制劑含量均勻度檢查，范圍一般為測定濃度的70%—130%；

3.溶出度和釋放度中的溶出量測定，范圍一般為限度的±30%，如規(guī)定了限度范圍，則應(yīng)為下限的-20%至上限的+20%；

4.雜質(zhì)測定，范圍應(yīng)根據(jù)初步實(shí)際測定數(shù)據(jù)，擬定為規(guī)定限度的±20%。

分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（耐用性）? 耐用性：系指在測定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測定結(jié)果不受影響的承受程度，為所創(chuàng)建的方法用于常

規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。

? 評(píng)價(jià)方法：

1.創(chuàng)建分析方法時(shí)，就應(yīng)考慮其耐用性。

2.如果測試條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫明，并注明可以接受變動(dòng)的范圍。

3.先采用均勻設(shè)計(jì)確定主要影響因素，再通過單因素分析等確定變動(dòng)因素。

?典型的變動(dòng)因素：

1.被測溶液的穩(wěn)定性、提取的完全性；

2.色譜系統(tǒng)的耐用性：色譜柱的變化、柱溫、緩沖液濃度的變化、組分變化、pH值的變化、流速等；

?結(jié)果要求：經(jīng)試驗(yàn)，測定條件小的變動(dòng)應(yīng)能滿足系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求，以確保方法的可靠性。