上接： 食品理化檢驗(yàn)方法主要內(nèi)容和使用要點(diǎn)解讀（上）
本期食品理化檢驗(yàn)方法主要內(nèi)容和使用要點(diǎn)解讀延續(xù)上期內(nèi)容，重點(diǎn)闡釋技術(shù)內(nèi)容中的分析步驟。
分析步驟：
1）試樣制備：試樣制備作為分析步驟的前端，要求關(guān)聯(lián)抽樣、制樣、檢驗(yàn)、復(fù)檢等具體實(shí)施情況，涉及抽樣數(shù)量（包含檢驗(yàn)數(shù)量、復(fù)檢備樣數(shù)量）、包裝個(gè)數(shù)、樣品預(yù)處理（冷凍、加入抗氧化劑、加熱熔融、含維生素類樣品避光等）、樣品制備部位、制備后樣品數(shù)量、制備后樣品存儲條件、制樣均勻性等。實(shí)驗(yàn)室制樣規(guī)程要充分消化吸收各方法對試樣制備的要求，考慮判定依據(jù)、試樣稱取量、產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)、化合物穩(wěn)定性等因素。復(fù)檢機(jī)構(gòu)也要和初檢機(jī)構(gòu)交流試樣制備的注意事項(xiàng)。
如，GB 5009.22-2016食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定液體樣品，如液體樣品（植物油、醬油、醋等）采樣量大于1L，對袋裝、瓶裝等包裝樣品需至少采集3個(gè)包裝（同一批次或號），將所有液體樣品用勻漿機(jī)混勻后，對其中任意的100g（mL）樣品進(jìn)行檢測。
2）試樣溶液的制備：整個(gè)食品安全性的檢測分析中，較大部分時(shí)間用在樣品的前處理上，而實(shí)驗(yàn)誤差也主要來自樣品前處理。
試樣提?。悍椒ㄖ幸话銜?huì)明確取樣量（注意精度要求），取樣量影響到抽樣數(shù)量和復(fù)檢備樣數(shù)量。方法中還包括前處理方式和稀釋倍數(shù)等，要充分理解測試對象的針對性，如目標(biāo)化合物的極性、形態(tài)、旋光、結(jié)合型或游離型、內(nèi)源型或外源型、穩(wěn)定性等。一般會(huì)有直接提溶劑提?。ㄈ绯曒腿?、微波萃取、加速溶劑提取等），也有酸水解、酶解、堿化處理、皂化、沉淀蛋白、蒸餾、索氏提取等。提取過程中可能會(huì)加入抗氧化劑，或進(jìn)行避光操作等；也可能是酸硝化消解，如元素的測定。不同基質(zhì)可能會(huì)采取不同的前處理方式，如GB 5009.120-2016食品中丙酸鈉、丙酸鈣的測定，蒸餾法適用于豆類制品、生濕面制品、醋、醬油等樣品，直接浸提法適用于面包、糕點(diǎn)。為保證提取的充分性，尤其內(nèi)源性結(jié)合的化合物，要考慮樣品的基質(zhì)分散性、固體樣品的滲透性（如茶葉加水浸泡、乳粉加水復(fù)溶等）、皂化完全、水解酶解充足、消解充分等，要注意酶活、時(shí)間、酸堿、皂化試劑量、提取溶劑量、提取功率、提取時(shí)間、提取次數(shù)等。
試樣凈化：凈化方式一般有液-液萃取、固相萃?。ǚ聪噍腿』蛘噍腿。?、固相微萃取、基質(zhì)分散、凝膠滲透、離子交換、免疫親和、分子印跡、酸堿轉(zhuǎn)化、QUECHERS處理、混合模式凈化、頂空分離等，部分農(nóng)藥殘留項(xiàng)目還采取磺化處理。凈化時(shí)需注意凈化原理，才能清楚每一步操作要點(diǎn)。一是注意凈化前對耗材的性能評價(jià)，還需考察耗材對空白是否存在干擾，方法驗(yàn)證時(shí)可針對多品牌的耗材進(jìn)行比較篩選。二是使用前的活化平衡，嚴(yán)格按照方法描述或產(chǎn)品說明書進(jìn)行，注意平衡時(shí)間和活化溶劑用量。三是上樣，如提取液有渾濁現(xiàn)象，如使用水溶液（緩沖鹽溶液、酸堿溶液等），提取溶液體積大、雜質(zhì)多，可采用低溫高速離心、快速濾紙過濾或玻璃纖維過濾等；上樣量需和凈化耗材規(guī)格（載量）匹配，還要注意上樣介質(zhì)，尤其極性、pH、上樣流速等，離子交換尤其對流速敏感。四是洗脫過程，按照方法選用合適的洗脫溶液，必要時(shí)可分步洗脫，洗脫流速對方法回收率也很關(guān)鍵；如回收率不穩(wěn)定或結(jié)果重現(xiàn)不好，可核查是否需要加大洗脫體積。特別注意的是，在進(jìn)行極性差異較大的兩相交換時(shí)要注意抽干。如GB/T 21981-2008動(dòng)物源食品中激素多殘留檢測方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法中，凈化（7.2）在上樣后，由甲醇-水介質(zhì)轉(zhuǎn)換為二氯甲烷-甲醇介質(zhì)洗脫，極性差異較大，需盡力抽干，才能充分洗脫目標(biāo)物質(zhì)。洗脫中還需要注意洗脫液的酸堿度，一定要正確收集目標(biāo)洗脫液。
另外，在有些情況下，提取后的試樣溶液還需要進(jìn)行衍生處理，其中衍生試劑用量、衍生介質(zhì)pH、衍生溫度時(shí)間、衍生后溶液放置的穩(wěn)定性等都對結(jié)果有一定影響。部分項(xiàng)目衍生后還要進(jìn)一步液液萃取凈化。如GB/T 21311-2007動(dòng)物源性食品中硝基呋喃類藥物代謝物殘留量檢測方法高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法，提取和凈化（7.2）操作中pH調(diào)節(jié)是關(guān)鍵，pH在7-7.5之間時(shí)，四種代謝物衍生物萃取效率最高。
試樣溶液的制備：試樣在經(jīng)過提取、凈化后，往往還要采取氮吹、旋蒸等濃縮處理，對一些較為不穩(wěn)定的目標(biāo)化合物，需注意溫度、流速、濃縮程度等。按照方法要求進(jìn)行復(fù)溶，為避免溶劑效應(yīng)，一般會(huì)采取初始流動(dòng)相比例的溶液進(jìn)行復(fù)溶。方法中還可能使用空白基質(zhì)溶液復(fù)溶來減少基質(zhì)效應(yīng)。有些獸藥殘留項(xiàng)目復(fù)溶后，如溶液仍顯渾濁，可采取低溫冷藏后進(jìn)行離心或在對目標(biāo)化合物沒影響的情況下使用少量正己烷進(jìn)一步脫脂。復(fù)溶過濾時(shí)需注意濾膜可能吸附或干擾的情況。
而元素項(xiàng)目，試樣溶液制備中重點(diǎn)關(guān)注的是試樣溶液的酸度和標(biāo)準(zhǔn)系列溶液酸度的一致性，在含量較低情況下，可能容器會(huì)對元素進(jìn)行吸附而影響檢驗(yàn)結(jié)果，需及時(shí)開展檢測。有些項(xiàng)目需要進(jìn)行顯色劑比色后測定，要注意顯色試劑、用量、加入順序、顯色溫度、時(shí)間及放置穩(wěn)定性等條件的控制。
3）空白試驗(yàn)：全空白試驗(yàn)監(jiān)控從試樣制備到試樣溶液的制備整個(gè)環(huán)節(jié)，對分析接觸工具（菜板、粉碎機(jī)等）、人員（制樣人員、檢驗(yàn)人員等）、試劑、接觸耗材（酶、固相萃取小柱、濾膜、色譜柱等）、試驗(yàn)器皿、儀器分析系統(tǒng)等對樣品的交叉污染或干擾至關(guān)重要。試樣制備必須注意防范污染，而試樣溶液的制備務(wù)必同步制備全空白溶液。 下接： 食品理化檢驗(yàn)方法主要內(nèi)容和使用要點(diǎn)解讀（下）
□余曉琴
四川省食品藥品檢驗(yàn)檢測院
